凝胶色谱法的原理

在做GPC测试的时候，科学罗盘测试平台的工作人员在和很多学生的交流中了解到，很多学生对GPC测试并不是很了解，他们的原理还处于小白阶段。鉴于此，科学罗盘测试平台团队组织相关同事对网上的海量知识进行了梳理，希望对科研圈的伙伴们有所帮助；

实验部分

一.实验的目的

掌握凝胶渗透色谱的工作原理。

掌握凝胶渗透色谱仪的基本操作和数据处理方法。

用凝胶渗透色谱仪测定聚合物的分子量及其分布，熟悉GPC在活性聚合研究中的应用。

二、实验原理

GPC是一种特殊的液相色谱。所用仪器与HPLC相似。GPC的分离是基于体积排阻机制。填充多孔凝胶或颗粒，孔径大小与待分离的聚合物分子相近。高体积的高分子化合物无法进入凝胶孔隙，首先从凝胶颗粒中流出，洗脱体积最小时间，高分子按分子量依次洗脱。

GPC的实验方法是利用已知分子量的同组分单分散聚合物标准样品，在与未知样品相同的条件下，获得一系列GPC谱图。将峰位置ve对lgM作图以获得校准曲线，并根据未知Ve获得相应的分子量。由于大部分聚合物标准样品难以获得，通常可以使用聚苯乙烯的校准曲线，此时获得的分子量仅具有相对意义。

从聚合物的GPC曲线的形状(对称、不对称、单峰、双峰等)可以大致知道聚合物样品的分子量分布。)，GPC峰的峰宽可以大致反映聚合物的多分散性。通过计算，可以得到聚合物的数均分子量Mn、粘均分子量Mv、重均分子量Mw和z均分子量Mz，进而可以得到聚合物的多分散系数D，由此可以得到聚合物的各种定性信息。

三。实验药物和仪器

凝胶渗透色谱仪、真空管、手套箱、安培管、玻璃注射器、离心机。

蒸熟的四氢呋喃(与钠和二苯甲酮回流至深蓝色，然后蒸熟待用)、精制苯乙烯、偶氮二异丁腈(AIBN)、2-氰基异丙基二硫代苯甲酸酯(CPDB)、液氮和甲醇。

四。实验步骤和现象

实验中得到的聚苯乙烯的GPC曲线如附图所示。聚苯乙烯测试样品的以下信息可从图中获得：

GPC的纵坐标表示色谱图的峰高，是检测器的响应信号。这是因为样品的折射率高于溶剂的折射率。经过RID转换后，这个差值转换成电信号的强度，单位是毫伏mv。横坐标是峰值时间，单位是分钟。

图中直立的峰是聚合物样品的峰，图中所示的值是其峰的积分面积。图中第一个倒峰是溶剂的峰，这是因为折射率小于溶剂的折射率而形成的。其他峰可以是分子量相对较小的测试样品的峰。在GPC图中，峰的顺序是根据物质的分子量，峰的顺序是由大到小。

第五，思考问题

相对分子量是在什么条件下得到的？在什么条件下可以得到绝对分子量？

答：只有当用于测试校准曲线的标准样品与待测物为同一聚合物，且测试条件完全一致时，GPC才能得到聚合物的绝对分子量；当聚合物标准样品难以获得，且校准曲线参考其他物质(如聚苯乙烯)的校准曲线时，只能获得相对分子量。

2.下图(A)显示了制作GPC校准曲线时聚合物标准样品的GPC曲线，图(B)显示了时间间隔后测量的聚合物样品的GPC曲线。对比两条曲线能发现什么问题？怎么解决？

答：通过对比两条曲线，可以发现GPC曲线的溶剂峰(图中箭头所示)偏离校准曲线的溶剂峰，流出时间从变为，会导致待测样品过早流出，测得的相对分子质量大于实际值。解决方法是重新测试聚合物标准样品的校准曲线，然后测试聚合凝胶色谱法的原理物的GPC曲线，得到更准确的聚合物分子量。

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质检总局要求各地统一 暂行

新华社北京9月22日电(记者徐博)记者22日从国家质检总局获悉，质检总局要求各级质检部门进一步加强乳制品生产企业的进厂监管，确保各项监督检查工作按照统一检验方法、统一检验仪器、统一检验结果判定规则的要求开展，严把原料准入关和产品出厂关。

近日，国家质检总局就各地质检部门在出厂监管中反映的问题发出通知，建议采用高效液相色谱(HPLC)、高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)和气相色谱-质谱(GC-MS)三种方法作为乳制品中三聚氰胺的检测方法。其中，使用高效液相色谱法(HPLC)作为判断方法。当检测到样品中三聚氰胺的浓度有效超过检测限时，将报告为阳性结果，其他两种方法作为补充，参照判定方法。

通知说，乳制品生产企业可以委托社会(包括其他企业)检验机构为其进行三聚氰胺检测。委托检测的数据和结果必须客观、真实，企业和委托实验室都应对检测数据和结果负责。

乳制品生产企业自身管理的奶源基地具有长期稳定的质量控制能力，能够保证原料乳质量安全，企业应当进行抽检。在地方政府的统一组织下，相关部门和经营者要对收奶、收奶、送奶进行严格监管。

此外，各级质检部门要严格区分质检部门的监督检查与企业自行组织的原材料进货检验和成品出厂检验，两者不能相互替代。质检系统各级检验检测机构要在优先保证完成质检部门安排的乳制品及相关食品检验检测任务的前提下，尽可能为企业提供检验检测服务。

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